收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

JunB-COX10通路在氮芥盐酸盐对肺气管上皮细胞能量代谢影响的作用研究

叶枫  程晋  赵远鹏  但国蓉  王宾  赵吉清  邹仲敏  
【摘要】:【目的】研究JunB-COX10通路在氮芥盐酸盐染毒支气管上皮细胞(16HBE)后的变化及与能量代谢改变的关系。【材料和方法】建立3、10、30‘M氮芥盐酸盐染毒16HBE细胞模型,MTS法检测染毒后3、8、24h细胞活性,高效液相色谱检测染毒组及对照组能量代谢指标ATμ、ADP、AMP含量,计算氧化磷酸化指标ATP/ADP及能量负荷(Energy charge,EC),Western Blotting检测信号调节分子JunB以及线粒体呼吸链功能酶COX10的变化。为研究JunB和COX10的表达变化机制,10μM芥染毒前使用5μMp-ERK1/2抑制剂U0126预处理3h以及提前2天采用siRNA沉默JunB基因作为干预。采用JC-1和DCFH-DA荧光染料,利用流式细胞术分别检测染毒8h线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potentia,MMP)和胞内氧自由基ROS变化。【结果】3μM氮芥染毒后各时相点,细胞活性没有明显降低;10μM氮芥染毒3、8h,细胞活性无显著变化,至24h活性降至90%;30μM氮芥染毒3、8、24h细胞活性分别降至正常的90%、70%、30%。ATP/ADP和EC检测发现,3和10μM氮芥染毒3、8h无明显改变,染毒24h ATP/ADP和EC均显著降低,其中3μM氮芥染毒ATP/ADP与EC分别降低36.3%和2.1%,10μM氮芥染毒后ATP/ADP与EC分别降低37.6%和4.2%。JunB在3μM氮芥染毒3h增加3~5倍,染毒剂量(至10μM)和染毒时间(至24h)对该变化无明显影响。COX10在3μM氮芥染毒后3、8h无明显的变化,至染毒后24h增加3~5倍,染毒剂量(至10μM)对该变化无明显影响。JunB沉默可以抑制10μM氮芥染毒引起的COX10增加,而U0126预处理可以抑制10μM氮芥染毒引起JunB增加。启动子转录因子分析COX1O上游737-730处有AP-1的潜在结合位点"TGGAGTCA"。10μM氮芥染毒8h,细胞的ROS和MMP无显著变化,而30μM染毒后ROS显著增加,MMP显著降低。【结论】线粒体损伤和能量代谢的改变与氮芥的染毒剂量、染毒时间有关。氮芥可能激活16HBE细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2-JunB通路,进而增强JunB-Fos聚合体AP-1以促进COX10表达,导致细胞的氧化磷酸化和能量消耗加强,该作用可能与氮芥细胞氧化应激有关。

知网文化
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978