脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊乙酰胆碱受体信号通路分子mRNA表达水平的影响

【摘要】：目的探讨脱氧鬼臼毒素(DOP)对美洲大蠊Periplarleta americana神经系统乙酰胆碱受体信号通路的影响。方法从美洲大蠊头部克隆乙酰胆碱受体信号通路上的关键信号分子nAChRα6亚基、CaM和CaMKⅡ的部分mRNA,并测定其序列。应用荧光定量PCR技术分别观察注射不同浓度DOP(10,45,80,115和150 g·L~(-1))24和48 h后上述3种基因表达水平的变化。结果测序结果显示,克隆出的美洲大蠊nAChR基因部分序列(539 bp)与赤拟谷盗Tribolium castaneum nAChRα6亚基基因的核苷酸序列一致性为84%;美洲大蠊CaM基因(435 bp)与雕木蝉Graphocephala atropunctata CaM基因的核苷酸序列一致性为85%;美洲大蠊CaMKⅡ基因(513 bp)与黑腹果蝇Drosophila melanogasterCaMKⅡ基因的核苷酸一致性为77%。实时定量荧光PCR实验表明:DOP处理48 h后对美洲大蠊nAChRα6亚基、CaM和CaMKⅡ基因表达水平大体表现出低剂量激活,高剂量抑制的特点。45～80μg·μl~(-1) DOP浓度范围内3种基因表达水平达到高峰,80～150μg·μl~(-1)浓度范围内表现为抑制作用,基因表达水平呈下降趋势。结论 DOP需要在美洲大蠊体内蓄积一定时间才有明显的作用,能与nAChR结合引起CaM-CaMKⅡ级联反应,使3种基因在低浓度组上调,高浓度组抑制,进而对美洲大蠊产生潜在的毒杀作用。