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基于荧光微球标记的腐马菌素B1快速定量检测免疫层析试纸条研究

李姮  
【摘要】:【目的】腐马菌素(Fumonisin,FB)是一类由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌等产生的真菌毒素。食用其污染的玉米不仅为畜牧业带来损失,而且对人类健康造成威胁,引起食道癌和神经管缺陷。分析FB残留的常用方法有高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法和酶联免疫吸附法等。上述方法灵敏、准确、特异,但是存在检测方法复杂,耗时长,费用高等缺点,不适用于市场现场监督。胶体金免疫层析试纸条法操作简便、快速,但灵敏度相对偏低,且只能用于定性或半定量分析。本研究建立了一种以荧光微球标为标记物的快速、简单、可定量检测玉米中FB_1的免疫层析试纸条。【方法】将50μg Ab溶于4ml 50mM MES(pH 6.5)中,加入100μL荧光微球,室温反应15分钟。加入0.5 mgEDC,涡动混匀,室温振荡反应2小时。加入0.1 M/L甘氨酸封闭30分钟。以12000r/m离心15min,弃上清,以0.05M PB重悬沉淀,4℃保存备用。取lg玉米样品由5 mL 0.01 M PBS溶液提取,涡动混匀5分钟后超声振动5分钟,以12000r/m离心5分钟,取上清20倍稀释于0.01M PBST溶液中。将120μL待测样品与1μL荧光微球标记抗体混合于96孔板中,避光振荡反应5分钟后,试纸条垂直插入微孔中,反应15分钟,取出试纸条置于烘箱中40℃烘干,用荧光检测仪进行读数。【结果】试纸条检测系列浓度标准品,每个浓度检测5次,绘制标准曲线,其线性回归方程为y=-267.2x+840.8,回归系数R~2=0.9949,定量检测范围为0.23—2.2 mg/kg,IC_(50)为1.32 mg/kg。玉米样品定量检测范围为230—2200 mg/kg。玉米样品中添加3个FB_1浓度,回收率均在91.4%—118.2%之间,RSD12%。与呕吐毒素、玉米赤霉醇、赭曲霉毒、单端孢霉烯交叉反应低,特异性良好,与FB2交叉反应为1.3%。【结论】该方法具有预处理简单、检测速度快、灵敏度高、定量检测的优点,可适用于玉米样品中腐马菌素的现场快速定量检测,满足各国对伏马菌毒素的最低检出要求。

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