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体外新评价方法——完整细胞核DNA检测板

张文众  李永宁  方瑾  梁春来  张倩男  
【摘要】:目的:为了丰富遗传毒理学体外评价、弥补氧化和抗氧化试验体外生物学方法的空白、丰富环境辐射生物学检测方法,我们发明了以亚细胞器为检测平台的新方法-完整细胞核DNA检测板。方法:制作DNA检测板把细胞核均匀的包埋在在玻片上,去除细胞核膜制作完整细胞核DNA检测板,在一定的条件下储存备用;遗传毒性物质检测:40mg/mlNaN3取4片DNA检测板,两片浸在含有6%H2O2的缓冲液中作为阳性对照组,另两片置于缓冲液中作为阴性对照组,染毒周期为4℃3小时;50mg/ml环磷酰胺取4片DNA检测板,两片浸在含有6%H2O2的缓冲液中作为阳性对照组,另两片置于缓冲液中作为阴性对照组,染毒周期为4℃3小时;氧化损伤检测;取4片DNA检测板,两片浸在含有6%H2O2的缓冲液中作为阳性对照组,另两片置于缓冲液中作为阴性对照组,染毒周期为4℃3小时;环境辐射检测:取4片DNA检测板浸在缓冲液中,两片用距离25cm的紫外灯照射作为损伤组,另两片置于室内接受可见光作为对照组,辐射时间为1小时;DNA损伤检测方法:处理过的DNA检测板均用碱性慧星试验电泳检测,彗星图象用Comet A软件分析,最后对数据进行统计分析。结果:DNA检测板制作成功,在一定的条件下可以长期保存备用;40mg/mlNaN3、50mg/ml环磷酰胺、6%H2O2和紫外线照射均导致DNA检测板的DNA损伤明显,和对照组相比具有显著性差异结论:DNA检测板有望在不久的将来广泛应用于遗传毒性物质检测、氧化-抗氧化检测和环境辐射检测工作中。

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