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补骨脂酚及其与补骨脂素联合的肾细胞毒性

江芳  周昕睿  王旗  张宝旭  
【摘要】:目的研究补骨脂酚(bakUchiol)及补骨脂酚与补骨脂素(psoralen)联合的肾细胞毒性,并进一步探讨补骨脂酚的毒性作用机制。方法用人肾近端小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells,HK-2),以马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)为阳性对照,研究补骨脂酚,补骨脂酚与补骨脂素联合以及在大鼠肝匀浆S9作用下,对HK-2细胞的毒性作用及其作用机制。用MTT法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测细胞膜损伤;倒置显微镜观察细胞形态改变;Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,PI染色法检测细胞周期。结果补骨脂酚,补骨脂酚与补骨脂素联合对HK-2细胞分别作用4,24,48和72 h,在较高剂量下(20,30,40μmol·L~(-1))细胞存活被明显抑制,呈剂量依赖,补骨脂酚24,48和72 h的IC50值分别为(26.40±4.78),(21.76±0.59)和(24.13±0.77)μmol·L~(-1);较高浓度的补骨脂酚,补骨脂酚和补骨脂素联合与HK-2细胞作用24 h,LDH的释放率明显增高;在大鼠肝S9作用下,补骨脂酚的细胞毒性明显降低;倒置显微镜下观察作用于不同浓度的受试药物在不同时间下的形态变化,HK-2细胞随着药物浓度的增高,作用时间的延长,形态越来越异常。补骨脂酚组最高剂量(40μmol·L~(-1)),补骨脂酚+补骨脂素联合组(20+5,30+5,40+5μmol·L~(-1))可诱导HK-2细胞发生不同程度的凋亡,并且能引起明显的细胞死亡。补骨脂酚组不同剂量(10,20,30,40μmol·L~(-1)),补骨脂酚+补骨脂素联合组均能影响细胞周期,主要表现为G2期减少,G1和S期增加或者减少,G2/G1改变。结论补骨脂酚对HK-2细胞有明显的毒性,与补骨脂素合用不能改善其毒性,经大鼠肝S9作用后,补骨脂酚的细胞毒性明显降低。补骨脂酚肾细胞毒性的作用机制可能为:(1)直接对细胞膜造成损伤;(2)引发细胞凋亡;(3)抑制细胞内的DNA合成,阻滞细胞的有丝分裂,从而干扰细胞内正常的合成和代谢过程,抑制细胞的增殖。

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