TaqMan探针检测转基因大豆含量方法的建立及应用

【摘要】：目的建立 TaqMan 探针法检测转基因大豆含量的实时定量 PCR 方法并应用于市售转基因食品含量的检测。方法以5.0%、2.0%、0.5%、0.1%、0%的转基因大豆 RoundUp Ready~(TM)为标准品(Fluka 公司),以特异 TaqMan 探针序列:5′(FAM)-cccactatccttcgcaagaccct-3′ (TAMRA),引物序列 F:5′-tgatgtgatatctccactgacg-3′,R:5′-tgtatcccttgagccatgttgt-3′,用实时荧光定量 PCR 方法扩增转基因大豆外源基因 CP4EPSPS 基因,在实验室建立定量转基因大豆检测的标准曲线,并对市场抽检的豆奶粉、素鸡、热狗肠、黄豆等12种豆类食品及制品进行含量分析。结果在实验室建立了 TaqMan 探针实时荧光定量 PCR 检测转基因大豆含量的方法,得到的转基因食品含量标准曲线方程式为Y=-2.8194X+27.1855,相关系数值 R~2为 0.9994。12种市售大豆及制品中五香茶干、豆奶粉、素鸡、热狗肠、薄白叶的转基因成分含量分别为2.46%、6.26%、13.95%、0.48%、0.66%。结论建立的 TaqMan 探针实时荧光定量 PCR 法能够快速地进行转基因大豆含量的检测,并可应用于市售转基因食品的检测。