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广西眼镜蛇毒中神经生长因子的分子生物学研究

宋慧  舒雨雁  
【摘要】:目的:对来源于广西眼镜蛇毒的神经生长因子(NGF)蛋白的基因进行体外扩增、克隆及序列分析,并表达。研究广西眼镜蛇毒神经生长因子诱导人类小涎腺腺样囊性癌细胞(NACC)凋亡的影响。方法:采用Trizol法从广西眼镜蛇毒腺中提取总RNA,经RT-PCR扩增出NGF的cDNA,测序后与其它来源的NGF比较同源性:将来源于广西眼镜蛇毒的NGF蛋白的基因克隆至融合表达载体pET-40b(+)中,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出NGF。利用蛋白印迹分析其是否有NGF抗原活性及用PC12细胞进行生物活力测定并通过细胞计数法与天然蛇毒NGF的活性比较。应用HE染色观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:广西眼镜蛇毒的NGF可在大肠杆菌中克隆和表达。DNA软件分析其有110 Amino Acids,Molecular Weight为12346.93 Daltons,等电点为7.643。DNA软件分析其有110 Amino Acids,Molecular weight为12346.93 Daltons,等电点为7.643。经蛋白印迹分析可知其具有NGF抗原活性,PC12细胞生物活力测定结果显示经纯化的融合蛋白具有NGF生物活力,为进一步研究NGF的结构和功能关系提供更多的信息。形态学观察到用药后的NACC细胞质空泡、核固缩、核染色质聚集等形态学变化现象。流式细胞仪检测到试验组细胞凋亡率高于对照组,说明广西眼镜蛇毒神经生长因子能诱导NACC细胞凋亡。

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