苜蓿花药培养预处理方法和培养基的研究

【摘要】：苜蓿是重要的饲草作物,同时在水土保持方面发挥着重要的作用。花药培养可以在短时间内获得加倍单倍体纯系,缩短育种年限和提高选择效率。为了提高苜蓿花药培养效率,以小孢子发育处于单核中期到单棱靠边期的苜蓿花药为材料,对花药培养预处理方法和培养基进行了研究,建立了苜蓿花药培养高效再生体系。试验结果如下：(1)苜蓿花药培养适宜的灭菌方法是将花蕾用自来水流水缓慢冲洗 30min,70%酒精浸泡灭菌2s,接着用0．1%升汞溶液浸泡灭菌4min,最后用无菌蒸馏水漂洗5次。 (2)接种前花蕾经4℃低温预处理有利于提高花药愈伤组织诱导率,其中以预处理3d 的诱导率最高。 (3)采用固液双层漂浮培养比固体培养和液体漂浮培养诱导效果好。接种密度以每个50mL 三角瓶接种5～10朵小花的花药为宜。以改良 Nitsch2为基本培养基,附加2,4-D 2．0mg/L 和6-BA 0．5mg/ L,麦芽糖6%～9%的苜蓿花药愈伤组织诱导率较高。(4)MS 培养基附加 NAA 0．5 mg/L 和 KT 2 mg/ L,蔗糖3%或蔗糖1．5%+麦芽糖1．5%的绿苗分化率较高。(5)培养基中附加水解酪蛋白700mg/L 或谷氨酰胺700mg/L 或脯氨酸600mg/L 对愈伤组织诱导和绿苗分化都是有利的。(6)生根培养基为 1/2 MS 附加1%蔗糖。