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表达短Lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制BmNPV增殖研究

叶秋霞  鲁银松  薛仁宇  曹广力  贡成良  
【摘要】:为了探讨RNAi抑制家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的效果,用带有lef-1 dsRNA表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo转染家蚕BmN培养细胞,通过G418(750-800μg/mL)筛选,获得了稳定转化细胞系。病毒感染试验显示,稳定转化细胞的病毒感染率比正常细胞低53%,转化细胞形成的多角体数量大约为普通细胞中的2/3,细胞培养上清中的游离病毒减少了90%,表明病毒在转化细胞中的增殖受到明显抑制;半定量RT-PCR结果显示,转化细胞中病毒lef-1的转录水平仅为正常细胞的2/5-3/5,表明转化细胞表达的lef-1 dsRNA抑制了病毒lef-1基因的表达同时将pigA3-LEF-Neo载体导入蚕卵,通过G418和绿色荧光的双重筛选,并经分子生物学鉴定获得了转基因家蚕。G6代的转基因系统抗性鉴定结果显示,除G6-B1外,转基因家蚕对BmNPV的半数致死浓度也提高了大约2-4倍,感染死亡率下降了5%-30%。

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