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IL-28A在家蚕BmN细胞及蛹体中的表达

陆叶  张孝林  郑小坚  薛仁宇  曹广力  贡成良  
【摘要】:目的探讨IL-28A基因通过Bac-to-Bac家蚕杆状病毒表达系统在家蚕BmN细胞及蛹中进行表达。方法应用PCR、基因克隆及共转染等技术将IL-28A插入到家蚕杆状病毒多角体启动子的下游,构建重组病毒;并在家蚕细胞及家蚕蛹中表达IL-28A。用ELISA试剂盒检测感染24h、48h、72h、96h后家蚕培养细胞及蛹中(24h、48h、72h、96h、120h、144h)IL-28A蛋白的表达情况。结果获得含有IL-28A基因片段的重组杆状病毒表达载体pFastBacTMDual-IL28A能在家蚕细胞中表达IL-28A蛋白,感染后的培养细胞中可见绿色荧光;感染pFastBacTMDual-IL28A的家蚕蛹血淋巴能高效表达IL-28A蛋白。ELISA表明感染重组病毒96h的BmN细胞蛋白表达量最高为11.4μg/106细胞,蛹的血淋巴中120h最高为33.2μg/ml,感染重组病毒120h蛹粉为8.488mg/g。结论 IL-28A基因在家蚕蛹中能获得高效表达,为进一步研制IL-28A的口服制剂奠定科学的理论基础。

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