利用家蚕BmNPV多角体晶体固定外源蛋白质的研究

【摘要】：家蚕核型多角体病毒在感染晚期大量表达产生多角体蛋白,并形成结构致密的超大分子蛋白质晶体,其作用是有效保护内部包埋的病毒粒子,保证子代病毒的传播得以延续。本研究借鉴多角体包埋病毒粒子的原理,观察多角体是否也能够将外源蛋白质固定入多角体内部。利用能形成多角体的BmNPVPolh+Bac-to-Bac表达系统分别构建了含有EGFP和LacZ基因的重组病毒,该重组病毒在表达形成多角体的同时分别表达EGFP和LacZ蛋白。结果表明,共聚焦分析表达EGFP的病毒感染后形成的多角体能够发射绿色荧光。利用SDS-PAGE也证实了多角体中包涵有EGFP蛋白或LacZ蛋白。进一步发现细胞中单独表达的EGFP在室温放置6h就检测不到荧光信号,而多角体中的EGFP放置一个月后仍能检测到绿色荧光。这一现象说明,将多角体与外源基因同时表达,多角体中会包埋外源蛋白,且能较长时间保存外源蛋白的生物活性。这一现象对于解决蛋白质长期保存提供了一条新的途径,对于开发含有毒素蛋白的新型生物杀虫剂也有很好的参考意义。但对于外源蛋白进入细胞核并包埋进多角体的机理还有待更深入的研究。