雷帕霉素逆转CML同源细胞株K562/A02对尼洛替尼耐药

【摘要】：目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)联合第二代酪氨酸激酶抑制剂尼洛替尼(nilotinib,AMN107)逆转对第一代酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼和ANM107交叉耐药的慢性粒细胞白血病(CML)同源细胞株K562/A02的作用效果方法:采用不同浓度组RAPA(0,5,10,20μmol·L-1)与不同浓度组AMN107(0,2.5,5,10μmol·L-1)分别单独或联合处理K562/A02细胞24h、48和72小时。AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用MTT增殖抑制实验检测雷帕霉素联用对K562/A02细胞生长抑制的影响,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测K562/A02不同给药组Bcr-abl、m-TOP、Bcl-2mRNA的表达,蛋白印迹(Western blot)检测K562/A02不同给药组Bcr-abl、m-TOR、Bcl-2蛋白的表达。结果:RAPA与AMN107联用能有效抑制K562/A02细胞株的生长,呈时间依赖性。5μmol?L-1AMN107和10μmol·L-1RAPA联合作用于K562/A02细胞48小时,细胞生长抑制率仅28.9±1.0%。5μmol?L-1AMN107和10μmol·L-1RAPA联合作用于K562A02细胞72小时,细胞生长抑制率达69.5±1.0%,凋亡细胞比例为48%,显著高于单药组(5μmol?L-1AMN107 23.4%;10μmol·L-1RAPA16.7%)(P0.05)。单独应用雷帕霉素或尼洛替尼对K562/A02细胞的Bcr-abl、m-TOP、Bcl-2 mRNA的表达和Bcr-abl、m-TOR、Bcl-2蛋白表达都有下降。联合用药对K562/A02细胞的Bcr-abl、m-TOP mRNA的表达和Bcr-abl、m-TOR蛋白表达较单用药组有显著的下降,并呈时间依赖性。结论:5μmol?L-1AMN107和10μmol·L-1RAPA联用能有效逆转K562/A02细胞耐药,而它的逆转机制可能与诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、BCR-ABL表达的降低有关。因此,体外的抗肿瘤效应表现出两者联合应用具有克服尼洛替尼耐药的作用