EB病毒LMP1通过JAK和MAPK通路介导STAT3调节VEGF的分子机制研究

【摘要】：目的:EB病毒编码的LMP1是鼻咽癌发生中重要的瘤蛋白,本研究将探讨LMP1调节VEGF在鼻咽癌生长和转移中的分子机制。方法:采用Western blotting技术来检测LMP1对STAT3磷酸化水平的调节;采用报告基因策略来观察JAK/STAT和MAPK/ERK通路对STAT的反式激活能力的影响。在此基础上,我们进一步从四个层面阻断LMP1、JAK3、MEK1、STAT3来观察VEGF的表达和分泌,采用Western Blotting技术和ELISA方法研究确定特异性靶向LMP1的脱氧核酶对鼻咽癌细胞中LMP1上调的VEGF蛋白表达和分泌的影响。最后,用Transwell方法确定LMP1调节的STAT3信号通路在鼻咽癌侵袭中的作用。结果:特异性靶向LMP1的脱氧核酶DZ1能显著抑制LMP1阳性鼻咽癌细胞中STAT3的磷酸化水平,且脱氧核酶能够有效地抑制LMP1诱导的STAT的反式激活能力;特异性JAK3抑制剂WHI-P131阻断JAK3/STAT信号通路的活化,呈剂量依赖性地抑制LMP1调控JAK3激酶激活的STAT3酪氨酸磷酸化水平;MEK1抑制剂PD98059阻断ERK信号通路的活化后,呈剂量依赖性地抑制LMP1调控的ERK激酶激活的STAT3丝氨酸磷酸化水平,且可以抑制STAT的反式激活能力,但其抑制程度弱于JAK3/STAT信号通路的阻断后的抑制程度。在鼻咽癌细胞中转染针对STAT3的siRNA100nm,STAT3总蛋白表达被抑制,磷酸化STAT3水平也被抑制。针对STAT3的特异性反义寡核苷酸也能抑制鼻咽癌细胞STAT3蛋白的表达,磷酸化STAT3水平也被显著地抑制。针对JAK3的阻断剂WHI-P131能显著抑制LMP1诱导的VEGF蛋白的表达和分泌,且随着阻断剂浓度的增加,呈明显的量效关系。MEK1的阻断剂PD98059能显著抑制LMP1诱导的VEGF蛋白的表达和分泌,且随着PD98059浓度的增加,呈明显的量效关系。STAT3的siRNA和反义寡核苷酸后,不仅STAT3总蛋白表达被抑制,STAT3下游靶基因VEGF的表达和分泌也分别被抑制。抑制LMP1调节的STAT3信号通路抑制了鼻咽癌细胞的侵袭能力。结论:LMP1调控STAT3的磷酸化及其反式激活能力;JAK3介导的STAT3活化主要是酪氨酸705位,而MAPK/ERK则通过介导STAT3丝氨酸727位磷酸化位点活化STAT3。LMP1介导的STAT3信号通路不仅可以上调VEGF的表达,而且可以促进VEGF分泌到细胞外发挥作用;LMP1调节的STAT3信号通路可以促进鼻咽癌细胞的侵袭。