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低氧和糖皮质激素上调GILZ的表达及可能的意义

王燕  马媛媛  蔡浩昱  卢建  
【摘要】:目的:低氧导致的组织损伤与炎症反应密切相关。已证实机体对低氧损伤的习服与适应受糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)的影响。在低氧条件下分泌增多的GC能通过糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor,GR)的介导,调节基因表达,但是至今对于参与了低氧适应的糖皮质激素/受体(GC/GR)的靶基因还知之不多。糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(Glucocorticoid inducedleucine zipper,GILZ)是近年来发现的GC/GR靶蛋白,因其具有与GC类似的免疫抑制、抗炎、抑制细胞增殖等功能,被认为是GC作用的重要介导子,本研究的目的是观察低氧以及低氧联合糖皮质激素对GILZ表达的影响,进而探讨GILZ是否参与了GC对低氧的保护作用。方法:正常清洁级雄性SD大鼠,体重250~300g,随机分组,低氧组放入含有8%氧气的混合气的低氧舱中,出舱后即麻醉大鼠取材,小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7去激素低糖培养液处理后放入含1%氧气的混合气的低氧舱中处理不同的时间,实时定量PCR和Western Blot分别检测大鼠脾脏组织和RAW264.7细胞中GILZ mRNA和蛋白的表达。结果:1、大鼠低氧处理8h GILZ mRNA表达水平就明显增高,为对照大鼠的2.2倍(p0.05),之后逐渐降低,但是24h组的表达水平仍高于对照,为对照的1.6倍(p0.05)。用Western blot方法检测低氧处理不同时间组大鼠脾组织GILZ蛋白表达得到了相似的结果。2、单纯去腺组大鼠GILZ mRNA的水平降低至假手术组大鼠的44%(p0.01),给去腺大鼠肌注Dex处理后,其脾脏GILZ的mRNA明显增高,约为去腺大鼠的13倍(p0.01);去腺低氧组与单纯去腺组相比GILZ的mRNA变化不明显,但去腺后Dex联合低氧处理组大鼠脾组织中GILZ的mRNA表达显著高于去腺低氧组,约为去腺低氧组的10倍(p0.01),也明显高于去腺Dex组,约为去腺Dex组的1.4倍(p0.05)。蛋白水平的检测得到相似的结果。3、低氧能浓度依赖性的上调RAW264.7细胞中GILZ的表达,12h达高峰为对照的2.5倍,低氧和Dex联合能协同上调GILZ的表达,约5.8倍左右.结论:低氧能单独上调GILZ的表达,也能协同GC上调GILZ的表达,体内实验中,低氧上调GILZ的表达需要GC存在。可能的生物学意义在进一步探讨中。

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