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小干扰RNA沉默HIF-1 alpha对VASP在乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中作用的影响

苏可  王静  石文韬  张洁  张玲  田毅浩  魏蕾  
【摘要】:目的:乳腺癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,控制乳腺癌的远处转移是乳腺癌综合防治中的关键环节。癌细胞的转移是一个复杂的过程,涉及到细胞与细胞外基质,细胞与细胞间的粘附和迁移。VASP(Vasodilator-stimulated phosphoprotein)即血管扩张刺激磷蛋白,是一种特异性的细胞骨架相关蛋白,与细胞骨架调节有关的各种细胞行为如细胞粘附和细胞运动密切相关。VASP与HIF-1alpha在肿瘤的发生与迁移的过程中具有紧密的相关性联系。但是具体机制不详。RNA干预(RNA-mediated interference,RNAi)作为目前研究较多的一门新兴技术,现逐渐成为基因功能和药物作用靶位点研究的重要工具。本实验通过RNAi抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞中HIF-1 alpha的表达水平,拟从HIF-1 alpha途径探讨VASP对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响。方法:常规方法培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,采用化学方法合成针对HIF-1 alpha(Genbank accessionnumber:BC012527)靶基因的三对siRNA片段(HIF-1 alpha-siRNA1、HIF-1 alpha-siRNA2、HIF-1alpha-siRNA3)和阴性对照siRNA。脂质体转染HIF-1 alpha-siRNAs(1、2、3)、阴性对照siRNA于MDA-MB-231细胞48h,使其终浓度为200μM。通过半定量RT-PCR和Western blotting检测HIF-1 alpha的mRNA和蛋白表达水平,细胞损伤修复实验检测细胞迁移能力。结果:HIF-1 alpha-siRNA1组的HIF-1 alpha mRNA表达水平下调到阴性对照组的65%,差异有显著性(P0.05)。HIF-1 alpha-siRNA1组的HIF-1 alpha蛋白表达水平下调到阴性对照组的50%,差异有显著性(P0.05)。HIF-1 alpha knockdown后VASP蛋白表达水平与阴性对照组相比,VASP表达明显上调约5倍,两组比较有显著性差异(P0.05)。HIF-1 alpha-siRNA1组MDA-MB-231细胞移动的平均速率较阴性对照组增快约一倍,两组比较有显著性差异(P0.05)。结论:HIF-1 alpha-siRNA1能明显影响VASP在乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中作用,提示VASP在促进MDA-MB-231细胞运动中可能是受到上游信号分子HIF-1 alpha调节的。

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