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MGMT在BCNU诱导骨髓瘤细胞耐药机制中作用的研究

李栋博  王季石  孙海燕  李伟达  
【摘要】:正目的研究与探讨MGMT(O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶)作为烷化剂抗性基因与骨髓瘤细胞多药耐药机制的相关性。方法 RT-PCR方法从人肝组织中获得MGMT基因并克隆入pGEM-T载体。用限制性内切酶EcoR Ⅰ及Kpn Ⅰ切下目的片段后重组构建含EGFP的真核表达载体pMGMT-IRES-EGFP。应用脂质介导法转染人骨髓瘤细胞系NCI-H929,RrealtimePCR 及Western Blot分别检测转染后目的基因RNA及蛋白的表达水平。同时应用小剂量BCNU(卡氮芥)法诱导另一组NCI-H929骨髓瘤细胞耐药,筛选耐药骨髓瘤细胞克隆并扩增,建立BCNU耐药

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