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HA-1树突状细胞核酸疫苗的构建及其特异性CTL的诱导

汪涯雅  张东华  刘文励  周红升  张路  戴敏  熊平  黄振倩  谭获  
【摘要】:正目的研究以次要组织相容性抗原HA-1为靶点,构建HA-1树突状细胞核酸疫苗用于造血干细胞移植后抗白血病治疗。方法从HA-1阴性表达的移植供者外周血中分离出单个核细胞,贴壁2h后去除非贴壁细胞,加入GM-CSF100ng/ml和IL-440ng/ml,体外培养7天,隔天半量换液补充细胞因子,诱导出树突状细胞。流式细胞术检测表面分子CD80、CD86、CD83及CD14的表达情况。混合淋巴细胞反应检测树突状细胞对于同种异基因淋巴细胞的促增殖效应(用同基因的外周血单核细胞作对照)。体外重组含HA-1基因的真核表达载体pcDNAA3.1/hisA-HA-1,经酶切和测序鉴定确定重组是否准确。通过电转法将重组质粒转染树突状细胞,构建树突状细胞核酸疫苗,用含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的质粒pEGFP-C1转染作对照,荧光显微镜下观察GFP 的表达情况可以反映质粒电转树突状细胞的转染效率。Western blot法检测48h后HA-1蛋白表达情况。将转染后的树突状细胞与同基因淋巴细胞加IL-2共孵育5天诱导特异性细胞毒性T淋

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