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脐血间充质干细胞培养条件的优化

迟作华  张洹  陆琰  
【摘要】:正目的探讨脐血中间充质干细胞(Mesenehymal stem cell,MSC)的培养扩增条件。方法比较不同的分离方法(羟乙基淀粉沉淀法,淋巴细胞分层液分离法)、接种密度(5×105/cm2.1×106/ cm2,5×106/cm2,1×107/cm2)、首次换液时间(2、3、4、5、6、7天首次换液)、不同的培养基(间充质专用培养基MesnecultTM,L-DMEM,DMEM/F12均含10%的胎牛血清)对脐血中的间充质干细胞原代培养过程的影响,将传第三代的细胞以1:1的0.25%胰酶和0.04%EDTA消化后,PBS洗涤3次, 制成1×106的细胞悬液,分为每管0.1ml,设置阴性对照,加入鼠IgG1-FITC,其它管加入鼠抗人 CD13-FITC、CD106-FITC、CD14-FITC、CIM5-PE、CD34-FITC、CD29-FITC、CD44-FITC, 室温孵育30分钟,流式细胞仪计数5000-10000个细胞,cell-quest软件分析。向脂肪细胞诱导,取第3代的细胞以5×103/cm2接种子放置有多聚赖氨酸处理的盖玻片的六孔板内,以脂肪诱导分化

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