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控制脐带血造血干/祖细胞增殖的关键细胞周期蛋白D亚型的确定

孙汉英  刘文励  周剑锋  谭细友  孙岚  孟凡凯  吴宁  刘丹  
【摘要】:正 目的细胞周期蛋白D(Cyclin D)是控制细胞能否进入细胞周期进行增值的一个关键分子,其表达具有组织特异性,明确Cyclin D在造血干/祖细胞中表达的主要亚型,以探讨造血干/祖细胞的细胞周期调控机制。方法(1)收集9例正常脐带血标本,用Midi-MACS免疫磁珠阳性分选试剂盒分离CD_(34)~+细胞,两次过柱分选,收集纯化细胞。(2)取1~2×10~6个细胞,标记FITC-CD_(34)IgG_1单抗,流式细胞仪检测分选前后CD_(34)~+细胞纯度。(3)将分选细胞按1×10~5/ml接种于IMDM培养基,其中含有12.5%胎牛血清、12.5%马血清和终浓度为100ng/ml的SCF,100ng/ml的FL,50ng/ml的IL-3,50ng/ml的IL-6和2u/ml的TPO,培养5~7天对CD_(34)~+细胞进行扩增。(4)取(0.5~1)×10~7个扩增后的细胞,提取细胞

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