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慢病毒载体的构建、改造及其包装细胞系的建立

李振宇  徐开林  潘秀英  鹿群先  孙海英  主鸿鹄  陈香梅  何徐彭  
【摘要】:正 目的构建并改造来源于人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒载体三质粒包装系统,建立慢病毒载体的包装细胞系,筛选出转导效率较高的内部启动子,完成其结构改造。方法三质粒系统中,包装质粒为△NRF,内含CMV启动子和来自胰岛素基因的Poly(A)位点。包膜蛋白质粒编码水疱性口炎病毒G糖蛋白,VSV-G。转移质粒的构建是将PPT元件插入pXZ11中的BamHI位点,再分别将肝细胞特异性启动子(LSP),泛醒启动子(PUB)和磷酸甘油酸激酶启动子(PGK)连接至PPT元件之后,绿色荧光蛋白(GFP)插入内部启动子之后。用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染来源于人胚肾细胞系

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