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大豆叶片暗诱导相关基因的差异表达研究

赵琳  李文滨  
【摘要】:正 大豆品系L13与另一对照大豆品种通过暗处理,分别提取叶片RNA,利用SMART技术合成cDNA,然后进行抑制性消减杂交(SSH)和利用反向northern斑点杂交筛选消减文库,寻找暗诱导差异表达的EST片断。目的是发现一些与暗诱导处理相关的大豆基因。实验获得69条EST序列,除去接头序列后进行GenBank nr(非冗余核酸数据库)Blastn和Blastx检索。结果显示:消减文库中有19个片段能够找到与之同源性较高的已知基因,其中2个功能未确定;Blastn检索EST数据库,有38个EST找到与之匹配的同源EST片段,其中23个EST片段功能无法推测。通过对检索结果进一步分析,对可能来自同一基因的可能一致的序列进行合并,最后得到48个代表不同基因的非重复序列片段,其中大豆来源的基因片段有41条。Blastn(EST数据库)检索结果表明,其中有2个片段未能找到与之对应的大豆EST序列,可能为新发现的EST片段。登陆到GenBank的序列有16个,其序列号为DR007276-DR007290和DR010177。进而,通过RACE法克隆出GAMYB和AP2两个与大豆光敏感有关的转录因子全长基因,并在GenBank上登陆。我们将所发现的与暗诱导相关的EST分为以下3大类:

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