【摘要】：本研究旨在以比较蛋白质组学的策略从人肺腺癌细胞株中发现与耐药有关的泛素化蛋白。以亲和色谱从A549细胞和A549/DDP细胞裂解液中捕获、富集泛素化蛋白质后,通过1D SDS PAGE分离,选取45‐85kDa的差异表达条带,胰蛋白酶酶解后,进行HPLC‐CHIP‐MS/MS分析,鉴定了11种蛋白质,其中,有7种是可能发生了单‐泛素化或多‐泛素化的底物蛋白质,4种是E3泛素蛋白连结酶相关蛋白。以Western blotting和Confocal laser scanning microscope进行验证的结果表明,RNF6、LRSAM1、TRIM25三种E3泛素蛋白连结酶在A549细胞中的表达均明显低于在A549/DDP细胞中的表达;顺铂(DDP)作用后,在两种细胞株中,三者的表达均明显下调,而在A549/DDP细胞中,DDP作用后的表达下调幅度较小。底物蛋白PKM2在A549细胞中的表达明显高于在A549/DDP细胞中的表达;DDP作用后,PKM2在A549细胞中的表达上调,在A549/DDP细胞中的表达下调。研究工作从蛋白质水平提示,在人肺腺癌细胞株中,耐药与泛素化过程的改变密切有关。