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肿瘤相关新基因MTLC的克隆及在肿瘤中的表达研究

邱广斌  郝冬梅  宫立国  李云慧  
【摘要】:目的本研究运用这一策略首次成功克隆到一个新基因MTLC,并对其生物学特性和在喉癌、胃癌中的表达作了初步分析.方法本实验室在前期喉癌组织原代培养和杂合性丢失(loSS of heterozygosity,LOH)研究中发现,染色体6q25区域存在高频率的缺失,在此基础上,借助EST数据库和人类基因组数据库,采用以表达序列标签(expressed sequence tag,EST)为电子探针.在人类基因组数据库中进行电子杂交,钓出相应的基因组序列并预测新基因的方法,大规模筛选喉癌相关新基因。结果RT-PCR扩增产物经琼脂糖电泳检测出现单一条带,大小约1000bp,与预期相符,MTLC基因编码蛋白分子量约26 592Dalton,理论等电点9.88。其97-114位氨基酸为一核定位信号结构域,Northern blot分析表明MTLC在心肌、肝、肾、脑、肺、肌肉等多种组织中均有表达且为单一转录本,但在肝脏中表达水平较高,其亚细胞定位于细胞核,而且MTLC对细胞生长有抑制作用。结论MTLC基因长约21Kb,含两个外显子,编码235个氨基酸,蛋白分子量约26 592Dalton,理论等电点9.88。MTLC在心肌、肝、肾、脑、肺、肌肉等多种组织中均有表达,表明它对细胞正常生长是必须的。MTLC基因在喉癌和胃癌组织中低表达,并可促进喉癌Hep2细胞和胃癌BGC823细胞凋亡,表明MTLC基因与喉癌和胃癌的发生有关。进一步用基因芯片分析,发现MTLC基因在正常组织与癌旁组织中表达无差异,但癌组织中低于癌旁组织,转移癌组织中低于癌组织,说明MTLc基因可能是一抑癌基因,其表达降低可促进胃癌的发生、发展及转移。但MTLC基因是否与其它肿瘤相关,还有待于进一步研究.

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