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靶向腺相关病毒载体介导siRNA分子体外抑制HBV基因表达

胡斌  
【摘要】:目的研究既携带HBsAg特异性多肽又表达短发夹RNA(shRNA)的重组2型腺相关病毒(Adenoassociated virus,AAV2)载体的靶向性和效应性。方法运用噬菌体展示技术筛选特异性结合HBsAg的多肽,通过重组PCR技术将特异性多肽插入到2型腺相关病毒(AAV2)核衣壳蛋白的587位氨基酸处,同时将针对HBsAg的shRNA插入到AAV2的基因组,构建既携带shRNA又靶向结合HBsAg的重组AAV2病毒。流式细胞术检测重组病毒感染HepG2.215细胞的特异性,ELISA检测病毒对HBsAg、HBeAg的抑制效应。结果筛选得到HBsAg特异性多肽,序列为SSYAPYVWQPIA。成功构建了同时携带靶向HBsAg多肽和携带shRNA的重组AAV2,命名为rAAVssyU6-shRNA-hrGFP。纯化的病毒滴度在109v.g/ml以上。rAAVssyU6-shRNAhrGFP对HepG2、HepG2.215细胞的感染率较AAV2明显升高,对HepG2.215细胞的感染率最高,并且可以抑制HepG2.215细胞HBsAg、HBeAg的表达。HBsAb封闭实验明显降低rAAVssyU6-shRNA-hrGFP病毒感染HepG2.215细胞的效率。结论 rAAVssyU6-shRNA-hrGFP对HepG2.215细胞的感染具有特异性,并且可以有效抑制HepG2.215细胞HBsAg、HBeAg的表达,有望成为介导siRNA分子有效治疗HBV的靶向载体。

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