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耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌体外生物膜形成机制的相关研究

侯渊博  张亚培  吴庆  陈华乐  李斌  周铁丽  曹建明  
【摘要】:目的研究耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌体外生物膜形成能力,并探讨其生物膜形成的相关机制。方法收集温州医科大学附属第一医院2008~2013年每年1~6月间住院患者不同标本中分离的肺炎克雷伯菌,琼脂稀释法测定亚胺培南、美罗培南、厄他培南对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(Mininal Inhibotory Concentrations,MICs),获取37株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonias,CRKPs);采用结晶紫染色法,超粘表型实验和产纤维素实验分析CRKPs形成生物膜的能力和相关表型;测定多粘菌素B对CRKPs的MICs值和生物膜最低消除浓度(minimal biofilm elimination concentrations,MBECs);PCR扩增CRKPs的毒力基因和7个管家基因;测定外排泵抑制剂羟基氢氯苯腙(carbonyl cyanide 3-chlorophenyIhydrazone,CCCP)对生物膜OD值的影响;检测实验菌株oqxA和oqxB外排泵基因的携带情况并测定外排泵基因在细菌不同状态下的表达量。结果 37株实验菌株对碳青霉烯类药物中的一种甚至是三种药物表现出不同程度的敏感性下降或者耐药,且CRKPs在近几年的检出率呈上升趋势;37株菌中超粘表型实验阳性有5株,产纤维素实验阳性有15株,但是超粘表型阳性与产纤维素阳性的菌株形成生物膜的能力并不比表型实验阴性的菌株强;多粘菌素B对实验菌株的MBECs值(3μg/ml~12μg/ml)与MIC值(0.25μg/ml~1μg/ml)相比升高了3~48倍且MBECs值的高低与生物膜OD值无关;CRKPs形成生物膜的能力与耐药程度、生物膜形成表型、毒力基因和ST型无明显相关性;亚抑菌浓度CCCP能促进CRKPs形成生物膜;实验菌株在含亚抑菌浓度CCCP的生物膜状态和浮游状态下oqxB的表达量比不含亚抑菌浓度CCCP的实验菌株高。结论本研究中实验菌株生物膜形成能力与耐药程度、生物膜形成表型、毒力基因和ST型关系不大,OqxAB外排泵可能在其生物膜形成过程中发挥着重要作用。

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