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CRISPR/Cpf1介导DF-1细胞DDX21基因敲除载体的活性检测

鲁国涛  胡爽  张莹莹  
【摘要】:旨在建立一种简单、快捷、高效、稳定的家禽基因组编辑系统,为研究DDX21基因功能及模型建立奠定基础。根据鸡DDX21基因序列,筛选构建4个g RNA表达载体并转染至状态良好的DF-1细胞,流式细胞仪收集表达红色荧光蛋白的阳性细胞,通过T7E1酶切法和TA克隆测序法评估基因敲除效率。T7E1酶切结果表明g RNA1基因靶向敲除活性最高,TA克隆测序显示敲除活性为33.3%。本研究初步建立了CRISPR/Cpf1系统介导的基因编辑技术,证明CRISPR/Cpf1能够稳定介导鸡DF-1细胞上的基因组编辑,这为进一步揭示DDX21基因功能、建立DDX21基因敲除的细胞系和动物模型提供了理论基础和科学依据。

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