不同组装的新城疫病毒样颗粒对小鼠树突状细胞成熟的影响

【摘要】：病毒样颗粒是由一种或多种病毒结构蛋白自行装配而成的空心蛋白颗粒,可作为安全、有效的新型疫苗越来越受到关注。树突状细胞作为目前发现的抗原递呈能力最强的专职细胞,控制着免疫应答的性质、强度和免疫记忆性。本研究以新城疫病毒样颗粒(NDV VLP)和树突状细胞(DC)为研究对象,围绕着VLPs如何诱导DC成熟以及抗原递呈为核心科学问题,以VLP特性以及免疫应答性质为研究目标,通过昆虫杆状病毒表达系统构建不同组装类型的NDV VLPs,通过流式细胞术、ELISA法分析免疫原刺激DC及成熟相关分子。结果显示,首先,以M蛋白为骨架配合F和/或HN蛋白可组装形成NDV VLPs,经Western Blot可检测到相关目的蛋白,在电镜下可观察直径约100nm的病毒粒子,具有囊膜突起以及完整空心结构。采用体外细胞因子诱导法成功获得高纯度的未成熟DC,形态呈毛刺状并聚集成簇,流式细胞术分析结果显示CD11c阳性率达80%以上;将不同组装类型的NDV VLPs刺激im DC后观察到细胞突起变多,以CCK-8法、流式细胞术、ELISA法分别检测细胞活性、表面成熟标志分子、相关细胞因子,结果相比于空白对照组,各VLP组DC表面MHC-II、CD40、CD80和CD86分子表达上调;相关细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-12p70的分泌有不同程度增加,但是各VLP组间存在明显差异,说明NDV VLP诱导DC成熟不仅依赖以M为骨架颗粒的结构,而且同样受到表明糖蛋白的活性影响。另外,体内结果显示,C57BL/6小鼠免疫VLP(M+HN组合)后脾细胞中双阳性DC数显著多于空白对照组,说明NDV VLP能募集更多的DC到次级淋巴组织,其中CD11c+CD40+DC、CD11c+CD80+DC和CD11c+CD86+DC含量显著高于VLP(单独M组合)并且CD11c+CD86+DC含量显著高于全病毒灭活组。综上所述,本研究组装的NDV VLP与真实病毒结构相似,可诱导体外DC成熟并募集DC归巢,为研究VLP激活天然免疫应答机制奠定基础。