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鹅源副粘病毒NP、M基因RNA干扰慢病毒载体构建及鉴定

王泽  党源  刘佳旭  杨建新  郭育培  张晓东  丁壮  
【摘要】:目的 构建并鉴定靶向鹅源副粘病毒NA-1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体,以便进一步研究抗病转基因鹅的培育。方法 针对GPMV NP、M基因mRNA保守区序列,分别设计并合成3对Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后线性化的pLKD-GFP载体,连接、转化,产生pLKD-shNP1、2、3;pLKD-shM1、2、3慢病毒干扰载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLKD-shNP、pLKD-shM分别与辅助质粒pCMV-dR8.2和pCMV-VSV-G共转染包装细胞293T细胞,包装产生重组慢病毒假病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果 PCR和测序证实,成功构建了慢病毒载体pLKD-shNP、pLKD-shM。包装慢病毒悬液滴度为:5×10~7TU/ml。结论 成功构建鹅源副粘病毒NA-1株NP、M基因shRNA的慢病毒载体,为应用慢病毒介导RNAi技术培育抗病转基因鹅奠定一定基础。

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