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Class I新城疫病毒反向遗传操作系统建立

刘华雷  陈云霞  管峰  郑东霞  赵云玲  王志亮  
【摘要】:根据I类新城疫病毒NDV08-004基因组序列(GenBank登录号FJ794269),设计7对引物,采用RT-PCR将NDV08-004基因组扩增的7个片段片段(A~G)分别克隆进pGEM-Teasy载体,然后采用单一的酶切位点将7个片段依次亚克隆到LT-pOLTV5转录载体中,构建了含NDV08-004全基因组cDNA的转录载体NDV08-004-pO。采用构建的三个辅助质粒(pCI-NP、pCI-P和pCI-L)与基因组NDV08-004-pO按照一定比例共转染BSRT7/5细胞,通过将转染上清接种SPF鸡胚进行继续复制,结果成功拯救出了具有血凝性的NDV08-004,初代血凝价为4log2,传代后血凝价达到7log2以上。I类新城疫病毒NDV08-004分离株反向遗传操作体系的建立为开展I类新城疫病毒的致病机理奠定了基础。

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