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红树植物秋茄叶片双向电泳样品制备技术的建立及优化

于冯  郑春芳  施孟如  刘伟成  仇建标  冀德伟  黄丽  陈少波  
【摘要】:为建立适用于秋茄(Kandelia obovata)叶片蛋白质组研究的双向电泳技术,对秋茄叶片蛋白质的提取、上样量、IEF及SDS-PAGE电泳等关键步骤进行了优化。结果显示:采用酚抽提法提取的蛋白浓度较低,约2.0μg/μL,SDS-PAGE电泳结果几乎无条带;与酚抽提法相比,采用改良TCA-丙酮沉淀法可显著提高提取液中蛋白质的含量。秋茄叶片蛋白质主要分布在pH4-7范围内,最适于采用pH3-10NL的胶条,17cm胶条最适分析上样量400μg,经银染得到清晰图谱,得蛋白点564±34个。以20%TCA-丙酮沉淀法结合优化的双向电泳参数对秋茄叶片全蛋白组进行双向电泳分离,获得了高分辨率、高重复性的双向凝胶电泳图谱,可用于秋茄差异蛋白质组学研究。

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