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IFN-γ对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β/Smad信号通路作用的研究

刘佳琦  胡大海  张战凤  官浩  折涛  张军  白晓智  
【摘要】:目的:研究干扰素-γ(IFN-γ)对瘢痕疙瘩成纤维细胞中TGF-β/Smad信号通路的作用,探讨IFN-γ治疗病理性瘢痕的可能机制。方法:体外分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞。采用实时定量PCR、蛋白印迹和免疫荧光细胞化学的方法分别检测了IFN-γ对基础状态和TGF-β_1诱导后CTGF和α-SMA表达量的影响;采用实时定量PCR和蛋白印迹的方法检测IFN-γ不同作用时间和作用浓度时对Smad3和Smad7表达量的影响。结果:(1)IFN-γ单独使用可以降低基础状态下CTGF的mRNA和蛋白水平,还可以显著抑制TGF-β_1对CTGF的上调作用(P0.01)。(2)IFN-γ单独使用可以减少α-SMA阳性细胞数量和α-SMA表达量,与TGF-β_1联合应用则可以显著抑制其对α-SMA的上调作用(P0.01)。(3)10ng/mL IFN-γ作用后,Smad3的mRNA和蛋白水平出现一过性升高,随后降低,至8 h后仍低于空白组(P0.01);而Smad7的mRNA和蛋白水平逐渐升高,达到峰值后降低,至8 h后仍高于空白组(P0.01)。(4)1、10、100 ng/mL IFN-γ均可下调Smad3同时上调Smad7的表达量(P0.01),而且IFN-γ浓度越高,作用愈为显著。结论:对于瘢痕疙瘩成纤维细胞,IFN-γ可降低基础状态下或TGF-β_1诱导后CTGF和α-SMA的表达量,表现出对TGF-β/Smad通路的显著拮抗作用。进一步研究表明IFN-γ的这一作用是通过以时间和剂量依赖方式下调Smad3和上调Smad7来实现的,这可能是IFN-γ治疗病理性瘢痕的重要机制。

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