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人P311腺病毒表达载体的构建及表达

谭江琳  彭旭  袁顺宗  马兵  张小容  罗高兴  吴军  
【摘要】:目的构建携带人 P311基因的腺病毒表达系统,并在包装细胞中制备相关病毒原液,以用于增生性瘢痕病因的研究。方法应用多聚酶链式反应(PCR)技术扩增人 P311基因,然后克隆至 pGEM T—Easy 载体,再构建穿梭质粒 pAdTrack-CMV/pGEM T—Easy—P311,在大肠杆菌 BJ5183 中与缺陷型腺病毒基因组 pAdEasy-1进行重组,构建 pAdEasy—P311腺病毒质粒,然后转染包装细胞 293细胞系,获得病毒原液感染成纤维细胞,利用 FPCL(Fibroblasts Populated Collagen Lattice, 成纤维细胞胶原网架系统)模型观察 P311基因对成纤维细胞生物学行为的影响。结果 PCR 扩增获得人 P311目的片段,并构建了 pAdEasy-P311腺病毒表达载体,经限制性酶切后证实该表达载体含人 P311基因,在293细胞中小规模扩增病毒后,经 PCR 检测证实病毒原液中存在人 P311基因,感染含人 P311基因的病毒原液后正常皮肤及瘢痕成纤维细胞在 FPCL 模型中均出现了收缩能力增强的现象。结论成功构建了缺陷型腺病毒表达载体 pAdEasy—P311,获得了携带人 P311基因的腺病毒原液,通过 FPCL 模型观察到 P311基因有促进成纤维细胞收缩的能力,这为我们进一步探讨增生性瘢痕的病因提供了实验依据,为解决临床瘢痕挛缩畸形提供理论基础。

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