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人β-防御素3在大肠杆菌中的融合表达及其抗微生物活性的初步分析

庹晓晔  徐明达  陈璧  柴家科  盛志勇  
【摘要】:目的研究在大肠杆菌系统中表达有活性的人β-防御素3(hBD3)。方法以构建好的pGEM—T— hBD3重组质粒为模板PCR获得hBD3成熟肽编码区基因,再将其插入到pGEX-4T-1载体的多克隆位点,构建pGEX-4T-1-hBD3融合表达载体,转化DH5α宿主菌,进行IPTG诱导5h,诱导菌经超声裂解后获得包涵体,包涵体经溶解、变性、复性和纯化处理后获得GST-hBD3融合蛋白,再经凝血酶切割,获得纯化的重组hBD3(rhBD3)。对rhBD3采用最小抑菌浓度测定法测定其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌活性。结果以与GST融合表达的方式,运用pGEX-4T-1系统在大肠杆菌中表达了hBD3, 融合蛋白以包涵体形式存在。融合蛋白经凝血酶处理使rhBD3释放出来,其对金黄色葡萄球菌的MIC为 4μg/ml;对大肠杆菌的MIC为8μg/ml。结论采用pGEX-4T-1融合表达系统在大肠杆菌中成功地表达了有活性的rhBD3。

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