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三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及机制研究

王国红  郭直岳  尹雅玲  魏林郁  李新娟  李东亮  
【摘要】:目的研究三磷酸腺苷对N9小胶质细胞的损伤作用及其机制。方法取对数生长期N9小胶质细胞,随机分为3组:①正常对照组:常规培养,不进行ATP处理;②ATP组:接种24h后行ATP处理;③KN-62干预组:KN-62孵育30min后行ATP处理,且KN-62存在于ATP作用整个过程。XTT法测各组N9小胶质细胞的活力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;细胞免疫荧光检测P2X7受体分布;Westernblotting检测N9小胶质细胞P2X7蛋白表达;ELISA检测细胞上清液中IL-1β水平。结果 500μMATP和1mMATP对细胞活力损伤程度较小,作用24h后,细胞活力仍可达88.5%±5.5%和88.2%±8.4%。当ATP浓度达到或高于2mM时,细胞活力迅速降低,细胞发生皱缩,且随ATP作用时间延长,细胞活力逐渐降低,细胞密度逐渐减少,细胞皱缩程度加重,而KN-62干预后细胞活力较ATP组明显增多,细胞密度及形态明显好于ATP组。细胞周期及凋亡检测结果显示ATP可使细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡比例明显较对照组增多(P0.01),KN-62干预可显著减轻ATP引起的细胞周期阻滞,细胞凋亡比例显著减少(P0.01)。免疫荧光显示,ATP及KN-62干预对N9小胶质细胞上P2X7受体的分布没有影响。Westernblotting显示,正常对照组、ATP组及KN-62干预组间P2X7表达水平没有明显差异(P0.05)。ELISA结果显示,ATP及KN-62干预对IL-1β的释放没有作用。结论高剂量ATP可诱发N9小胶质细胞损伤,其机制与P2X7受体介导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关,而与小胶质细胞的炎症反应无关。

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