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钩体外膜蛋白编码基因LipL45和LipL41的保守性分布及其在不同致病株中的同源性分析

张湘燕  于洋  何平  杨杨  胡宝瑜  聂一新  蒋秀高  郭晓奎  
【摘要】:本研究中,我们将培养的处于对数期的15株包括L.interrogans,L.borgpetersenii和L.weilii三种致病性钩体在内的钩体菌体蛋白进行SDS-PAGE电泳,用制备的各种抗外膜蛋白兔抗血清作免疫印迹法 (Immunoblot)检测,获得各种外膜组分在不同致病性钩体中的初步分布情况。Immunoblot检测显示,二种外膜蛋白抗血清与大多数致病性钩体菌体蛋白反应均产生阳性条带,MAT试验结果也显示二种外膜蛋白抗血清与大多数致病性钩体凝集反应呈阳性。另外,我们用RT-PCR从mRNA水平上检测了这些外膜蛋白基因在人工培养的部分致病性钩体中的表达。结果显示,二种外膜蛋白LipL45和LipL41在所选的多数致病性钩体中均有不同程度的表达,而在对照组二株非致病性钩体中均不表达,提示此二种外膜蛋白基因可能与钩体致病相关。用此二种钩体外膜蛋白或相关蛋白克隆产物包被96孔板作ELISA检测显示,其中重组外膜蛋白LipL45和LipL41 与22名患者血清以及4名阳性对照血清均呈现不同水平的免疫阳性反应,而与10份正常人血清呈阴性反应。

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