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三种亲和层析体系纯化大豆凝集素的比较研究

王利民  秦贵信  
【摘要】:正大豆凝集素(Soybean Agglutinin,SBA)是指大豆中能与N-乙酰基-D-半乳糖胺/半乳糖特异性结合的糖蛋白,分子量约120kDa,由略有不同的4个亚基构成四聚体,每个亚基分子量约30kDa,在超速离心中随7s蛋白一起沉降。SBA自20世纪中叶被首次发现并命名以来,由于其具有特殊的生物学功能(与游离的N-乙酰基-D-半乳糖胺/半乳糖或细胞膜糖蛋白上的N-乙酰基-D-半乳糖胺/半乳糖结合), 如今在抗营养作用、选择性分离骨髓干细胞、分离糖蛋白、靶向给药、植物分类学及人类血型鉴定等方面的研究越来越多。得到高纯度的SBA是进行上述研究的前提。最初采用等电盐析、移动界面电泳结合超速离心沉淀技术只能得到少量的SBA。后来又发展了离子交换和磷酸钙层析法。应用上述SBA的特殊生物学功能进行亲和层析是近年来普遍采用的方法。目前最常用的亲和层析体系是N-乙酰基-D-半乳糖胺-epoxy-Sepharose 6B、半乳糖胺-CH-Sepharose 4B和瓜尔胶3种亲和层析体系。本研究的目的就是比较3种亲和层析体系的优劣并确定其中的最佳方法,以提取大量的SBA用于抗营养研究。试验用 N-乙酰基-D-半乳糖胺-epoxy-Sepharose 6B、半乳糖胺-CH.Sepharose 4B和瓜尔胶3种亲和层析体系对大豆中的凝集素(血凝素)进行分离提纯,并进行了多方面的比较。试验结果表明,3种亲和层析体系纯化大豆凝集素的产率存在显著差异,依次分别为147±15、110±12、128±16mg,lOOg生大豆;3种亲和胶的饱和吸附力差异显著,分别为12.2±1.4、7.5±1.3、2.1±1.6 mg/ml胶。上述试验结果说明,目前纯化大豆凝集素最理想的方法是N-乙酰基-D-半乳糖胺-expoxy.sepharose 6B亲和层析体系。可能的原因可能是因为:3种体系虽然都是亲和层析,但它们的配基(N-乙酰基-D-半乳糖胺、半乳糖胺和半乳糖)对SBA 的特异性亲和力不同,所以纯化的效果也不同。

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