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多重RT-PCR诊断甲真菌病的实验研究

李筱芳  刘维达  沈永年  陈辉  吕桂霞  
【摘要】:目的初步建立多重 RT-PCR 诊断甲真菌病的方法。方法采用 Trizol 提取真菌的 RNA:选择3对引物(真菌通用引物,皮肤癣菌特异性引物和酵母特异性引物)建立3重 RT-PCR 体系,采用红色毛癣菌、白念珠菌和短帚霉摸索反应条件和验证体系的适用性:并用红色毛癣菌来测定反应的灵敏度。结果1.所采用的真菌通用引物28SrDNA、皮肤癣菌特异性引物 ACT 和酵母特异性引物 ACT1有较好的通用性和特异性;2.在适宜的反应条件下,无论对单模板,还是多模板,该反应体系均能扩增出目的片段,未见明显非特异片段的干扰;3.该反应体系对模拟临床标本的检测灵敏度为10~2cfu/ml.结论多重 RT-PCR 技术可在较短时间内检测出皮肤癣菌,酵母和霉菌等三类病原菌,并可判断菌的活力,结为临床快速诊断和及时、合理地治疗甲真菌病和其他真菌感染性疾病提供参考。

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