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脱氧核酶抑制Period1基因表达及对小鼠吗啡精神依赖的影响

周薇  刘延友  王跃锜  刘英辉  王正荣  
【摘要】:目的研究针对Period 1mRNA的脱氧核酶体外切割作用,并在细胞水平探讨其对Period1 基因表达的调节,以及脑室注射脱氧核酶后对阿片类药物精神依赖的影响。方法按照Santoro10-23型脱氧核酶结构模型设计原则,采用Zuker等设计的MFold软件对Period1 mRNA二级结构分析,设计合成针对Period1mRNA的脱氧核酶(DRz164),并构建pcDNA3-Per1164体外转录载体,在T7RNA聚合酶作用下体外转录,转录产物与脱氧核酶DRz164混合,不同的反应时间下检测脱氧核酶DRz164的切割效率。pcDNA3-Per1和DRz164在脂质体介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),流式细胞术(FCM)检测转染细胞内Period1基因表达水平。脑室注射DRz164,建立小鼠条件位置偏爱模型,观察对吗啡精神依赖的影响。结果DRz164对Period1mRNA组分具有切割作用,在30、60、90和120分钟的剪切百分率分别为36.4%、40.5%、47.8%和63%。转染DRz164后,RT-PCR半定量检测Period 1 mRNA与对照组相比减少42.4%。细胞内PER蛋白表达减少57.2%。给予DRz164后小鼠未能形成对吗啡的位置偏爱。结论在体外脱氧核酶DRz164能够特异性切割Period1mRNA,剪切活性随时间延长而升高;转染细胞内抑制Period1基因表达;小鼠脑室注射DRz164后可拮抗吗啡引起的奖赏效应,缓解对吗啡的精神依赖。

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