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乳腺肿瘤细胞源性外泌体诱导巨噬细胞极化的研究

蒋小丽  姚宇迪  刘卓琦  朱伟锋  罗达亚  
【摘要】:目的:探讨不同恶性表型乳腺肿瘤细胞的外泌体能否诱导巨噬细胞极化,为靶向外泌体的临床诊疗提供借鉴与参考。方法:1、使用PMA及细胞因子诱导人单核细胞株THP-1后,qRT-PCR、免疫荧光和流式细胞术检测CD68、CCR7、CD206的表达。2、获取高、低度恶性乳腺癌细胞株培养上清液作用M_0型巨噬细胞后,流式细胞术检测M_1型巨噬细胞分子标志物CD68/CCR7和M_2型巨噬细胞分子标志物CD68/CD206的表达。3、提取高、低度恶性乳腺癌细胞株细胞培养上清液中的外泌体,免疫印迹、透射电镜、纳米颗粒跟踪分析定性外泌体。将外泌体添加入完全培养基培养M_0型巨噬细胞,流式细胞术检测M_2型巨噬细胞分子标志物CD68/CD206的表达。结果:1、使用PMA作用于人单核细胞株THP-1后,M_0型巨噬细胞标志物CD68即有稳定的表达。使用LPS联合IFN-γ诱导M_0巨噬细胞后,与对照组相比,CCR7的表达在M_1型巨噬细胞中升高(p0.05),且在M_1型和M_2型巨噬细胞中存在差异。使用IL4联合IL13诱导M_0巨噬细胞后,与对照组相比,CD206的表达明显升高(p0.05),且在M_1型和M_2型巨噬细胞中存在差异。2、高、低度恶性表型的乳腺癌细胞株培养上清液处理M_0巨噬细胞后,巨噬细胞中CCR7表达均无明显变化(p0.05),CD206的表达均明显升高(p0.05),而高、低度恶性表型的乳腺癌细胞株上清液诱导的CD206表达无明显差异(p0.05)。3、免疫印迹、透射电镜、纳米颗粒跟踪分析显示成功提取外泌体,其颗粒直径分布在80~200nm之间。乳腺癌细胞株的外泌体添加入完全培养基培养M_0型巨噬细胞后,与对照组相比,巨噬细胞的CD206表达均明显上升(p0.05),高、低度恶性表型乳腺癌细胞株组间并无变化(p0.05)。结论:CD68~+/CCR~7+与CD68~+/CD206~+的流式细胞术分析可以作为M_1和M_2型巨噬细胞特异活化的分子标志物检测;不同恶性表型的乳腺肿瘤细胞均可以在体外通过外泌体介导的方式诱导M_0巨噬细胞极化为M_2型巨噬细胞。

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