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SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达

秦莉  吴少庭  王西明  袁仕善  雷明军  潘辉榕  黄达娜  高世同  张仁利  屈伸  
【摘要】:目的构建 SARS 冠状病毒棘突蛋白部分序列2(S2)的原核表达质粒,分析其在大肠杆菌的表达状况。方法采用逆转录聚合酶链式反应技术从 SARS 冠状病毒基因组中扩增出编码 S 蛋白的第 2170到2814位碱基的基因片段,克隆至 pMD18-T 载体,PCR 筛选阳性克隆并测序。用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体 pGEX-4T-2,转化大肠杆菌 JM109,PCR 和双酶切鉴定转化菌落。将阳性菌落经 IPTG 诱导,SDS-PAGE 和免疫印迹分析靶蛋白的表达。结果 RT-PCR 扩增出 S2 特异片段,经测序与 GenBank 比对存在1处碱基突变。S2基因片段亚克隆至表达载体 pGEX-4T-2构建成重组表达质粒,并在 JM109中表达了 S2融合蛋白。结论成功构建了 SARS 冠状病毒 S2的重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达了 S2融合蛋白。

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