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OX40L基因修饰小鼠腹腔巨噬细胞抗肿瘤的实验研究

史琳  冯永堂  许传武  牟东珍  苗乃法  刘艳菲  林志鹃  邸大琳  吴国庆  魏兵  
【摘要】:目的:通过脂质体法将构建的OX40L真核表达载体转染小鼠腹腔巨噬细胞,观察OX40L基因修饰的巨噬细胞对小鼠体内外抗肿瘤效应的影响。研究方法:(1)无菌获取小鼠腹腔巨噬细胞,将含有绿荧光蛋白报告基因的OX40L重组质粒pIRES2–EGFP–OX40L采用脂质体法转染巨噬细胞,培养12h,然后经相差显微镜观察转染后巨噬细胞形态变化,荧光显微镜法观察转染后巨噬细胞绿荧光蛋白的表达效果,RT–PCR法鉴定转染细胞OX40L基因的表达。(2)用H22肿瘤细胞可溶性抗原体外处理转染OX40L基因的巨噬细胞,经尾静脉输注正常小鼠,7d后取脾脏制备淋巴细胞悬液,采用MTT法检测转染巨噬细胞诱导的H22特异性CTL对H22的杀伤。(3)取小鼠脾淋巴细胞与肿瘤抗原处理的转染有OX40L基因的巨噬细胞体外混合培养,利用3H-TdR掺入法检测转染巨噬细胞对抗原特异性淋巴细胞增殖的影响。(4)荷瘤小鼠腹腔注射转染OX40L巨噬细胞,观察其对荷瘤鼠腹水产生及生存时间的影响。结果:(1)荧光显微镜观察可见OX40L基因表达载体转染的巨噬细胞发出绿色荧光,RT–PCR技术从转染细胞扩增出了800bp左右包含OX40L基因的目的片断。(2)MTT检测结果显示肿瘤抗原触发OX40L基因转染细胞诱导后CTL对H22杀伤率在靶效比为1:5,1:10,1:20时杀伤率分别为22%,43%,91%,转染OX40L巨噬细胞明显高于空载体转染及PBS对照组在各靶效比的杀伤率,差异有显著性(P0.05)。(3)3H-TdR检测结果显示肿瘤抗原冲击OX40L基因转染巨噬细胞处理抗原与淋巴细胞作用后的cpm值为12859.67±389.04,显著高于空载体转染巨噬细胞组7877.72±320.64和肿瘤抗原冲击未经处理的巨噬细胞组8270.78±255.36(P0.05)。(4)荷瘤小鼠腹腔注射转OX40L巨噬细胞治疗后,比对照组腹水形成时间推迟5d以上、存活时间延长9d以上。结论:(1)构建的OX40L真核表达载体成功转染巨噬细胞并获得较强的表达。(2)外源性OX40L基因修饰的巨噬细胞能促进其对肿瘤抗原提呈,增强淋巴细胞对肿瘤抗原的特异性应答,提高CTL的杀伤活性。(3)OX40L转染的巨噬细胞体内注射治疗可延长荷瘤鼠的生存时间。

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