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HBpreS2硫代反义寡核苷酸对TRAIL诱导Hep G2.2.15细胞凋亡的影响

梁晓红  高立芬  马春红  韩丽辉  刘素霞  崔敏  刘华  张志勇  孙汶生  
【摘要】:目的:研究TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡的效应,探讨针对preS2翻译起始区的硫代反义寡核苷酸(PS-asODNs/preS2)对凋亡敏感性的影响。方法:不同浓度TRAIL蛋白作用于HepG2.2.15细胞,24h后MTT法检测TRAIL的细胞毒效应。应用可溶性DR5蛋白封闭TRAIL,进一步验证其特异性的细胞毒作用。HepG2.2.15细胞中加入PS-asODNs/preS2分别作用24h、48h后,检测其对表面抗原、e抗原合成和HBVDNA复制的抑制情况,以无关序列寡核苷酸(PS-rODNs)作用组作为对照。HepG2.2.15细胞经PS-asODNs/preS2或PS-rODNs作用24h后,再加入TRAIL100μg·L-1,TUNEL法检测细胞凋亡情况。通过流式细胞术比较PS-asODNs/preS2作用组和PS-rODNs作用组HepG2.2.15细胞表面TRAIL受体表达的影响,初步探讨PS-asODNs/preS2逆转TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡的分子机制。结果:TRAIL可有效诱导HepG2.2.15细胞凋亡,且呈现剂量依赖性,100μg·L-1TRAIL杀伤接近50%的HepG2.2.15细胞。可溶性DR5(60mg·L-1)有效阻断TRAIL的细胞毒效应,提示HepG2.2.15细胞的生长抑制由TRAIL特异性诱导所致。PS-asODNs/preS2可有效抑制HepG2.2.15细胞表面抗原、e抗原的表达以及HBVDNA的复制。经PS-asODNs/preS2作用24h小时后的HepG2.2.15细胞再加入100μg·L-1TRAIL,细胞凋亡率为18.5%±9.5%,显著低于PS-rODNs对照组细胞(62.1%±12%)。流式细胞术结果表明,PS-asODNs/preS2作用组HepG2.2.15细胞表面TRAIL受体的表达与对照组细胞相比无显著性差异。结论:PS-asODNs/preS2可下调HepG2.2.15细胞对TRAIL的敏感性,部分逆转TRAIL诱导肝细胞的凋亡反应。提示preS2可能在调节TRAIL诱导HBV感染肝细胞凋亡中发挥一定作用,对肝细胞感染的预后有一定关系。该作用与细胞表面TRAIL受体的表达水平无关。

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