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SET shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定

黄新凤  叶金波  蒋英芝  任晓虎  黄培武  刘建军  
【摘要】:目的构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在TCE毒性机理中的作用提供技术支持。方法通过NCBI检索SET序列和查阅文献,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLNX-shRNA1 vector。挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒。将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Westem Blot鉴定干扰效果。结果PCR和测序结果证明双链shRNA已经正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L=02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞。结论利用慢病毒介导RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞。

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