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孕酮对氧糖剥夺PC12细胞的作用

侯志慧  吴春平  李东亮  
【摘要】:目的:探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞(rat pheochromocytoma cell line,PC12)氧糖剥夺(oxygen-glucosedeprivation,OGD)后葡萄糖转运体(glucose transporter 3,GLUT3)基因和蛋白的表达情况以及孕酮(progesterone)对其影响。方法:培养PC12细胞,用含50ng/mL神经生长因子的DMEM培养基诱导5天,取生长状态及诱导分化良好的PC12细胞,随机分为三组:(1)正常对照组:PC12在37℃、5%CO_2培养箱中正常培养;(2)氧糖剥夺组:用缺氧液置换正常培养液,将培养板置于95%N_2和5%CO_2持续通气的密闭容器中(37℃)30min造成缺氧,用复氧液置换缺氧液,放入培养箱中培养24 h;(3)孕酮(PROG)组:处理方式同氧糖剥夺组,在缺氧液和复氧液加入终浓度为10nmol/L孕酮。观察氧糖剥夺24h后PC12细胞的活性,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting检测GLUT3 mRNA和GLUT3蛋白的表达情况。结果:OGD组PC12细胞活力OD值(0.600±0.050)明显低于正常对照组(0.986±0.060)(P0.01),PROG组细胞活力(0.766±0.031)显著高于OGD组(P0.01)。与正常对照组(0.602±0.024)相比,OGD组GLUT3 mRNA(0.852±0.07)的表达增加(P0.01);与OGD组相比,孕酮组GLUT3 mRNA(1.057±0.089)的表达明显增加(P0.05)。与正常对照组(0.027±0.0006)相比,OGD组GLUT3蛋白(0.417±0.0006)表达增加(P0.01);PROG组GLUT3蛋白(0.056±0.001)表达量明显高于OGD组(P0.01)。结论:孕酮可能通过上调GLUT3的表达以增加细胞内葡萄糖的转运,提高氧糖剥夺后神经元的能量利用,起到神经保护的作用。

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