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CML细胞系KT-1/A3对INF-α应答蛋白的研究

张济  陈汉春  刘新发  刘清霞  曹燕飞  刘佳  
【摘要】:慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是起源于骨髓造血多能干细胞恶性增生血液系统疾病。干扰素(interferon,IFN)是由多种细胞产生的具有广泛抗病毒、抗肿瘤和具有免疫调节作用的可溶性糖蛋白,临床研究表明IFN-α不仅可使CML患者获得比常规化学治疗更高的血液学和遗传学缓解率,而且能有效地控制慢性病情的进展,延长患者的生存时间。KT-1/A3是已被证实对IFN-α作用敏感的CML细胞株。本研究对KT-1/A3细胞分设实验组(5×104/ml)和对照组(5×104/ml),实验组用IFN-α(1000U/ml)处理, 分别诱导48小时,离心、PBS洗涤、收集细胞,提取细胞全蛋白,利用双向凝胶电泳技术分离蛋白质、银染、图像扫描、并用蛋白电泳图像分析系统软件(Imagemaster2D Elite3.01) 分析,在等电点PI 3-10范围内,2-D电泳均分离出700±25个蛋白质点(n=3),比较IFN-α实验组和对照组蛋白表达差异,并对部分差异蛋白进行生物质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定获取肽质量指纹图,再利用生物信息学对肽质量指纹图进行分析。其中对一在实验组显著表达而对照组未检测到的蛋白点肽质量指纹图进行分析;结果提示该蛋白点为ISG15蛋白 (interferon-stimulated protein,15kDa)。RT-PCR及Northern印迹杂交证实实验组的 ISG15mRNA丰度均高于对照组。ISG15蛋白由干扰素刺激基因ISG15编码,对ISG15基因序列分析发现在其启动子区域包含两个干扰素刺激应答元件(interferon-stimulated response element,ISRE)/干扰素应答因子结合位点(interferon response factor binding site,IRFE),ISG 蛋白是类泛素家族的一成员,它参与机体从妊娠到先天免疫反应等多种生物学活动,此外, ISG15能修饰体内几种重要的蛋白分子(serpin2a,ERK1/2,phospholipase Cγ1(PLCγ1), Statl,and Jak1.)及影响Ⅰ型干扰素的信号转导途径。ISG15在KT-1/A3细胞中对INFα的应答表达提示ISG15可能与INF-α抗慢性粒细胞白血病作用有关。

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