凡纳滨对虾血蓝蛋白75亚基变体的克隆与表达

【摘要】：本研究采用分子生物学、免疫学的方法,对凡纳滨对虾血蓝蛋白75kDa亚基可能存在的变体及其免疫相关性进行了探索。结果发现,凡纳滨对虾体内至少存在6种血蓝蛋白变体,生物信息学分析发现,这些变体与中国明对虾的血蓝蛋白具有较高同源性,而与凡纳滨对虾同源性较低,并且是由相同的原始序列经过突变和基因重组产生,初步推断为生物进化优势选择的结果。其中测得两种变体V12和V5U的cDNA长为2257bp,开放读码框为2037,编码679个氨基酸,具有信号肽和典型的血蓝蛋白Cu2+离子结合区结构域和保守的组氨酸残基。变体在心、鳃、肝胰腺、胃、肠、后肠、肌肉、淋巴器、脑组织和血细胞中具有组织表达差异性,尤其V5U变体,在肌肉,胃和后肠中没有表达,在肝胰腺中表达不明显。免疫相关实验结果证实,副溶血弧菌等6种病原菌人工感染凡纳滨对虾后,两种变体出现不同程度的表达上调,且2种变体对不同病原菌胁迫的响应程度不同。所获研究成果为阐明血蓝蛋白免疫功能多样性的分子机制奠定了良好的基础。