基于正交试验设计优化三疣梭子蟹SRAP-PCR反应体系

【摘要】：相关序列扩增多态性(Sequence Related Amplified Polymorphism,SRAP)是一种高多态性和丰富遗传信息量的新型分子标记,其结果稳定,容易操作和引物通用性高,在遗传多样性分析、种质鉴定、遗传图谱构建等方面的广泛应用逐渐从植物转移到水产动物中。为了建立三疣梭子蟹SRAP技术体系,该文利用正交设计L_(16)(4~5)对三疣梭子蟹SRAP-PCR反应体系的5因素(TaqDNA酶,Buffer,模板,dNTPs,引物)在四个水平上进行优化试验,得出如下结论:各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次为:模板,10×Buffer,dNTPs,Taq DNA酶,引物;筛选出各反应因素的最佳水平,建立三疣梭子蟹SRAP—PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq DNA酶0.50 U,Buffer 2.75μL,模板DNA 10 ng,dNTPs 0.20 mM,引物0.20μM。这一优化体系可望在三疣梭子蟹遗传多样性和性别连锁标记等研究中应用。