从日本鳗鲡表皮粘液中分离的一种新的抗菌蛋白

【摘要】：鱼类表皮粘液中的抗菌蛋白能够抵御病原微生物入侵。本试验采用pH 3.0醋酸抽捉,并通过100℃加热10min的方法粗提,结合弱阳离子交换层析和反相高效液相层析技术从日本鳗鲡表皮粘液中分离具有抗菌活性的蛋白。结果表明,醋酸粗提物对革兰氏阳性菌-溶壁微球菌具有抗菌活性;离子交换层析分离,位于65.18 ml的组分为主要的洗脱组分,其对应的洗脱乙酸铵浓度为(0.76～1.6)mol/L,此时洗脱乙酸铵的pH值约为5.2,因此,目的蛋白的pI可能接近5左右,应该是一种阴离子肽;离子交换层析的主要洗脱组分反相高效液相色谱分离得到的AJN-10组分(目的蛋白)对本实验室分离至发病鳗鲡的常见致病菌-革兰氏阴性菌嗜水气单胞菌B27菌株具有抑菌作用,AJN-10组分对应的洗脱乙腈浓度大于50%,说明其疏水性较强,此外,它又能溶解于水中,说明它同时具有较强的极性,因此,AJN-10可能是一种两亲性分子:AJN-10经SDS-PAGE电泳后呈现单一蛋白条带,分子量约为10,2719 Da;并且AJN-10耐酸,热稳定性好,具有小分子肽的特点,因此,AJN-10不同与先前从鳗鲡表皮粘液中分离到蛋白,可能是一种新的两亲性阴离子肽。本实验表明日本鳗鲡表皮粘液中存在具有抗菌活性的蛋白,为进一步研究日本鳗鲡表皮粘液抗菌活性物质的性质、研究和开发阴离子抗菌肽积累基础数据。