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一个新的凋亡相关基因APMCF1的克隆及组织分布的初步研究

晏伟  王文亮  张萍  费玲玲  
【摘要】:目的克隆人类凋亡新基因 APMCF1,制备其特异性多克隆抗体,研究 APMCF1在各种肿瘤和正常组织中的表达。方法利用RT-PCR方法,从人乳腺癌MCF-7凋亡细胞的总RNA中扩增APMCF1的成熟蛋白区段, 克隆入pGEX-KG中,构建APMCF1的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达获得 GST-APMCF1融合蛋白,以此融合蛋白为免疫原制备兔抗血清,以Western blot鉴定抗体特异性;利用制备的抗体结合组织芯片技术研究 APMCF1在各种肿瘤和正常组织中的表达。结果成功克隆了APMCF1的开放读框序列847bp并表达了GST-APMCF1融合蛋白。制备了特异性抗GST-APMCF1多克隆抗体;免疫组化结果表明APMCF1可在多种肿瘤及部分正常组织中表达。结论人类凋亡相关新基因APMCF1的成功克隆及该分子多克隆抗体的初步制备,为进一步研究APMCF1的功能提供了必要工具。

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