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结直肠癌组织蛋白质组学分析

邢晓明  黄琼  王英红  来茂德  
【摘要】:目的分析结直肠癌患者癌组织及配对正常粘膜组织差异表达的蛋白质,寻找与结直肠癌发生、发展相关的分子标记物。方法固相pH梯度双向凝胶电泳分离结直肠癌患者配对癌组织及正常粘膜组织的总蛋白。银染显色,PDQuest 2-DE软件分析,对差异表达的蛋白质点进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析。用半定量RT-PCR、western blot及免疫组织化学方法进一步验证双向凝胶电泳结果的准确性,探讨其中两个差异表达蛋白质Secretagogin及GRP78在结肠癌不同组织中的表达情况及组织定位,并对Secretagogin在检测神经内分泌肿瘤的敏感性方面进行进一步分析。结果比较结直肠癌组织及配对正常粘膜组织蛋白质表达图谱,共获得35个差异表达的蛋白质。其中在癌组织中表达上调大于5倍的蛋白质点有15个,在癌组织中表达下调大于5倍的蛋白质点有20个。经质谱分析、数据库查询,初步鉴定了14个蛋白质。RT-PCR及western blot进一步验证了双向凝胶电泳的结果。 Secretagogin阳性表达的细胞主要分布在正常结直肠粘膜隐窝的基底层,形态学上表现为神经内分泌细胞,其在检测神经内分泌肿瘤的敏感性方面优于Syn,NSE及CgA。GRP78蛋白在结直肠癌组织中的表达明显高于正常粘膜组织,但在mRNA水平上癌组织和正常组织之间无明显差别。结论双向凝胶电泳结合质谱分析是筛选肿瘤异常表达蛋白质的有效手段。筛选到的35个差异表达的蛋白质可能与结直肠癌的发生、发展有关。Secretaogin主要表达于神经内分泌细胞中,其检测神经内分泌肿瘤的敏感性高于传统神经内分泌标记物。GRP78可能在结直肠癌的发生、发展中起作用,这种作用可能涉及翻译后改变。

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